進入Ensembl 的首頁,搜尋格輸入species: Mouse & 基因名稱。點選此項結果的gene,進入後看到gene的詳細資料。
請在修飾過的區域設計一組PCR引子,可區分野生型與剔除後的DNA片段,PCR產物大小介於 300-500 bp,再以PCR的方式進行確認。
核心目前所使用的試劑組為Promega Wizard Genomic-DNA Purification Kit。
進入Ensembl 的首頁,搜尋格輸入species: Mouse & 基因名稱 點選此項結果的gene,進入後看到gene的詳細資料 點選 location 的標籤,點選 configure this page 若為129 品系 在 main panel 的標籤下點選 other DNA alignment 點選 (force) labels ens_m37_129AB22 點選右上角 save & close 若為B6 品系 在 main panel 的標籤下點選 external data 點選 (force) labels BAC map 點選右上角 save & close
129品系的BAC可在LifeSciences (http://www.lifesciences.sourcebioscience.com/)購買,B6品系可在BACPAC Resource Center (BPRC) (http://bacpac.chori.org/)購買
請參照 A Highly Efficient Recombineering-Based Method for Generating Conditional Knockout Mutations. Liu P, Jenkins NA, Copeland NG. Genome Res. 2003 Mar;13(3):476-84.
探針必需在同位互換區(homologous arm)之外,且在限制酶切點之內,才能辨別出 targeted 與 random integration 。
建議在300 bp~1000 bp
平均一個案子會篩選 24 x 8 共 192 株。