1. 提供技術協助使用者製造基因轉殖/剔除小鼠
  • 模擬人類疾病
  • 作為新藥開發及藥物確效驗證
  • 研究基因功能
  • 2. 利用基因操控的方法建立現有疾病動物模式,特別針對國人特有的疾病,供生物醫藥學界研究使用。
    3. 建立分子診斷學及病理形態學的方法,以利確定動物病徵,期能了解致病之相關機制。
    4. 開發新技術使動物模式的建立更容易。
    5. 結合生物技術教育及生命倫理學觀念的推廣,以提升國人尊重生命及導正濫用科技的迷思。
    Top

    中文摘要

    值此後基因體世代(post-genome world),隨著人類與小鼠 基因體定序已完成,科學界正試圖對所有的基因的功能和疾病的機制作更深入的了解。其中最重要的方式是製造突變基因使生物體由於“得到功能”或“失去功能” 而產生異常變化使科學家得以研究該基因的正常功能。小鼠無疑地是最能模擬人類生理機制的動物之一。在過去17年來,小鼠胚胎幹細胞及相關技術的發展與推廣至全球許多實驗室是非常重要且強有力的闡釋基因功能的技術,然而這麼多的努力也只完成約總基因體的10%。顯然學界仍須要更多的基因轉殖核心實驗室來協助科學家加速完成基因功能的分析。最近全世界已有非常多的超級基因轉殖中心正大規模的利用小鼠來建立人類基因體的動物模型。

    本計畫主持人所領導的團隊在轉殖與基因剔除鼠技術方面已有良好的基礎,而且具國際水準的好文章。此外,本團隊也專精於小鼠胚胎幹細胞株的建立,核轉殖技術,以及其它的小鼠育種技術,包括小鼠無菌化等等,是組織完整的核心服務團隊,尤其校方大力支持下,因此再擴大建立服務全國的國家型轉殖鼠核心實驗室是主 持人責無旁貸的任務。根據日前本團隊向幾個大學及研究中心所做的問卷調查結果皆充分顯示轉殖鼠核心設施成立的迫切性,因此本計畫主要目的是提供在台灣從事 生物醫學研究良好的基因轉殖與剔除技術,提升相關方面的研究水準,並發展條件式與組織特異性 (Cre-loxP based conditional tissue specific) 基因剔除系統,以協助學界建立更近似人類疾病的小鼠動物模式。期望經由此整合計畫,一方面能強化本院基因轉殖鼠核心實驗室,並能成為國內基因體醫學研究的重要支援單位。

    The core facility led by Prof. Lin assisted by Dr. I-Shing Yu, Co-P.I. of the core facility, has helped nearly one hundred and eighty domestically and from abroad (U. Chicago, U. North Carolina, Memorial Sloan Kettering Cancer Center, and U. Miami, Florida, USA; Nanyang Tech U. and DUKE-NUS Med School, Singapore, etc.). This core facility has provided services to internationally renowned investigators, and has generated more than 300 germline-transmitted knockout (KO)/knock-in (KI) mouse lines. We have also generated nearly 30 indel-KO/point mutation KI-mice by CRISPR/Cas9 technology. Many of the KO/KI mouse lines have been proven useful in understanding gene function, mimicking human diseases and in searching for new drug candidates. Our users have published more than 69 research articles of which more than 50% are in high impact journals such as Immunity, Nature Immunology, J. Clinical Investigation, J. Exp. Med., Nature Communication, etc.
           The technologies we provide with this core facility include the following.
    1. Nuclease-based system
      a. CRISPR/Cas9 for KO
      b. Point mutation and small fragment KI
      c. Multiple gene KO/KI
      d. KO/KI of unique mouse lines

    2.ES cell based system
      a. Classical and Conditional KO mice
      b. Large fragment and point mutation Knock-in mice
      c. Blastocyst injection of ES cells from international core facilities
        (e.g., IMPC: International Mouse Phenotyping Consortium)
      d.(large fragment) Knock-in to Rosa26 locus, HPRT locus, Col1a1, H11 etc.

    Top





    服務項目

    A4-1. 基因標的載體建構 (Targeting construct production)     
    核心實驗室使用 129/sv 及 C57BL/6 品系之染色體 DNA 構築委託人所需之基因標的載體。  
    A4-2. 胚胎幹細胞基因標的 (ES cell gene targeting)     
    核心實驗室使用 129/sv 及 C57BL/6 品系的胚胎幹細胞進行基因標的,在取得基因標的載體後,經由電穿孔(electroporation) 將基因轉染入細胞(R1 or JM8A3), 再進行篩選取得至少 100 個獨立細胞株後,交由委託人鑑定。  
    A4-3. 嵌合鼠產製 (Chimera production)     
    核心實驗室接受包括由核心製備的胚胎幹細胞株或購自其他機構之幹細胞,利用顯微注射打入 C57BL/6 的囊胚 (blastocyst),以取得嵌合鼠。核心實驗室目前使用 129/sv or B6 來源的胚胎幹細胞,一次顯微注射限定單一個細胞株號碼,依毛色 70% 嵌合度 (chimerism) 的標準,交付二隻嵌合鼠。購自其他機構之幹細胞所得嵌合鼠毛色不限。  
    A4-4. Cre-loxP 基因標的胚胎幹細胞 (Cre-loxP Based Gene Targeting of ES Cell)     
    核心實驗室接受組織特異基因剔除的服務申請,在取得研究基因後,經由電穿孔 (electroporation) 將基因轉染入細胞(R1 or JM8A3),再進行篩選取得至少100個獨立細胞株後,交由委託人鑑定。   
    A4-7. 標的後之胚胎幹細胞篩選與確認 (Screening of targeted ES cells)     
    核心實驗室使用南方墨點法進行胚胎幹細胞基因標的後之篩選。   
    A4-9. 小鼠胚胎纖維母細胞製備 (Mouse embryonic fibroblast (E13.5)) 
    核心實驗室提供懷孕 13.5 天之小鼠胚胎纖維母細胞製備 。  
    A4-10. Cre/Flpe重組酶轉染胚胎幹細胞 (Cre/Flp recombinase transfection)        
    A4-11. 胚胎幹細胞DNA萃取服務(DNA Extraction of Targeted ES Cells Service)        
    A4-12. 南方墨點法篩選用探針測試(Probe Testing for Southern Screening Service)        
    A4-13. 嵌合鼠配種服務(Chimera Breeding Service)        
    A4-14.細菌人工染色體萃取服務 (BAC DNA Extraction Service)
    A4-15.基因標的載體DNA製備服務 (Extraction of Targeted Vector Service)
    A4-18.以核酸酶法製作基因修飾小鼠(Production of  gene modified mice by nuclease based  approach)
    A4-18-1.小響導RNA製作(Production of small guide RNA)

    A4-18-2.以階梯式核酸梅法製作loxP/FRT 剔入小鼠 (Production of loxP/FRT Knock-in mice by stepwise nuclease-based approach)

    Top
     

     


     
     
    簡介| 實驗室成員|服務項目| 收費辦法|申請服務| 核心實驗室網頁| 回首頁
     
    10055 台北市中正區徐州路2號7樓 臺大基因體中心-基因剔除鼠核心實驗室 聯絡人:顏靜慈 博士 電話:02-23123456 #66907
    意見及問題歡迎來電或寫信至 gstring301@gmail.com
    Copyright © 2007 All Rights Reserved